从表达文库中分离出一个克隆，并做了该克隆所表达的蛋白质的抗体。用抗体对小鼠胚胎做原位杂交，发

现该蛋白质存在于脑组织。Northern杂交结果显示，脑组织中存在3个不同的转录产物，其中2个还存在于其他组织。解释为什么RNA存在于其他组织，而蛋白质仅存在于脑组织。

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发布时间：2020-10-23

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第1题

从正常细胞和反转录病毒（不含癌基因)感染的细胞（克隆1)中，分别分离出DNA，用限制酶酶切后做电泳并

从正常细胞和反转录病毒(不含癌基因)感染的细胞(克隆1)中，分别分离出DNA，用限制酶酶切后做电泳并转膜。以某原癌基因的cDNA作探针进行杂交，结果如下图所示：

从正常细胞和反转录病毒（不含癌基因)感染的细胞（克隆1)中，分别分离出DNA，用限制酶酶切后做电泳并反转录病毒插入位置在哪里？

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第2题

利用简单重复序列（SSR)作探针从文库中分离出几个克隆。现在要鉴定与这些重复序列毗邻的单一序列，

利用简单重复序列(SSR)作探针从文库中分离出几个克隆。现在要鉴定与这些重复序列毗邻的单一序列，以期在基因组中建立基于SSR的STS。 (1)如何鉴定分离出的克隆中是否有单一序列？ (2)最有用的STS是那些与人群中存在多态性的SSR相连的STS。如何鉴定一个STS是否与多态性的SSR相连？

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第3题

一个癌基因，从序列上看似乎编码一个转录因子。当放在细胞中表达时，该基因的产物是完全不溶的，这影响了对其功

能的直接检测。免疫染色表明，这种蛋白质定位于细胞核内，如同推测的一样，是一种转录因子。如果能够测出它所结合的DNA序列，就可以从现有的序列资料中查找已知基因启动子的天然位点，从而能够找到它所调节的基因。

有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA，思路是(图Q25.8)：①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体，在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)]；②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中，转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合；③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸；④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。

一个癌基因，从序列上看似乎编码一个转录因子。当放在细胞中表达时，该基因的产物是完全不溶的，这影响了对

图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸，N代表任何一种核苷酸；EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路，用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验，这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链，经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后，用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA，将片段克隆到质粒中，并测定了10个独立的克隆(表Q25.1)，问：

表Q25.1 10个克隆的序列

一个癌基因，从序列上看似乎编码一个转录因子。当放在细胞中表达时，该基因的产物是完全不溶的，这影响了对

注：画线的序列是PCR引物部位，两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始，所有序列中结合位点的方向都是相同的。

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第4题

人类基因组DNA经过Sau3A（G↓ATC)部分酶切后，连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上（G↓GATCC)。BamHⅠ位于

人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后，连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于多克隆位点的SalⅠ和NotⅠ之间，二者距离20 bp。 (1)从文库中分离出某克隆(克隆1)，分别用NotⅠ(N)、SalⅠ(S)或SalⅠ十NotⅠ(S十N)酶切后，电泳分离并用EB染色。DNA转移到膜上后，用载体上的DNA作为探针进行杂交，结果如下图所示：

人类基因组DNA经过Sau3A（G↓ATC)部分酶切后，连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上（假设同源序列50 bp以下则无杂交信号。在此基因组DNA上标上所有的SalⅠ和NotⅠ位点，标明酶切位点间距离。 (2)从同样的文库中分离到带有重叠片段的克隆(克隆2)，用同样的酶切、电泳、转膜后，以克隆1的DNA为探针(包括基因组DNA和载体DNA)进行southern杂交，结果如下图所示：