微生物育种的目的是什么?为了实现这一目的,可采用哪些方法?请简述这些方法的基本含意或原理。
微生物育种的目的就是人为地使微生物的某种代谢产物过量积累,把生物合成的代谢途径朝人们所希望的方向加以引导,或者促使细胞内发生基因的突变或通过重新组合优化遗传性状,实现人为控制微生物,获得我们所需要的高产、优质和低耗的菌种。为了实现这一目的可采用下列4种方法:
(1)诱变育种这是指利用各种诱变剂处理微生物细胞,提高基因的随机突变频率,再通过一定的筛选方法(或特定的筛子)获得所需要的高产优质菌株。
(2)代谢工程育种这是一种利用基因工程技术对微生物代谢网络中特定代谢途径进行有精确目标的基因操作,改变微生物原有的调节系统,使目的代谢产物的活性或产量得到大幅度提高的一种育种技术。根据微生物不同代谢特征,一般采用改变代谢途径、扩展代谢途径以及构建新的代谢途径等方法来达到目的。
(3)体内基因重组 是指重组过程发生在细胞内,这是相对于体外DNA重组技术(或基因工程技术)而言。体内基因重组育种是指采用接合、转化、转导和原生质体融合等遗传学方法和技术使微生物细胞内发生基因重组,以增加优良性状的组合或者导致多倍体的出现,从而获得优良菌株的一种育种方法。
(4)DNA Shuffling技术 这是一种全新的人工分子进化技术。DNA Shuffling(又称洗牌技术)能模拟生物在数百万年间发生的分子进化过程,并可在短的实验循环中定向筛选出特定基因编码的酶蛋白活性提高几百倍甚至上万倍的功能性突变基因。其基本原理是先将来源不同但功能相同的一组同源基因,用DNA核酸酶Ⅰ进行消化产生随机小片段,由这些随机小片段组成一个文库,使之互为引物和模板,进行PCR扩增。当一个基因拷贝片段作为另一基因拷贝的引物时,引起模板转换,重组因而发生。导入体内后,选择正突变体作新一轮的体外重组。一般通过2~3次循环,可获得产物大幅度提高的重组突变体。