图6－3－5中，DNA片段两端是双链，但中间是单链，上链的极性已标记。

图Q2.2中的DNA片段两端为双链，中间为单链，上面一条链的极性已标出。

图Q2.2一个具有单链缺口的双链DNA分子

两份几乎相同的DNA样品(例如从突变型和野生型病毒X得到的DNA分子)混合、变性、再退火，可得如图2-3-24所示的同源双链和异源双链。同源双链含来自同一份DNA样品的两条链，而异源双链则含来自两份不同DNA样品的链。两份DNA样品的顺序差异导致了异源双链中因不能形成氢键配对而保持单链状态的非互补区域。若这些区域长度大于50至100个核苷酸；则在电镜下呈环状。图B显示两种常见的异源双链结构。异源双链DNA的检测对于大片段缺失、碱基添加以及取代的定位是很有效的方法。试利用图中的数据构建一个野生型DNA的图谱，算出突变型中片段缺失的位置。

四膜虫(Tetrahymena)是一种有两个胞核的有纤毛原生动物，小胞核(micronucleus)具有细胞染色体的主拷贝，其参与有性接合，但不参与日常基因的表达。大胞核(macronucleus)是一种由很多大小基因双链DNA片段形成的细胞基因组的“工作”拷贝(小染色体-minichromosomes)，其参与基因转录，小染色体的许多拷贝中都有核糖体RNA的基因。可用梯度离心将其与其他小染色体分离，以进行进一步的研究。

通过电镜检测发现每个含核糖体基因小染色体为线性结构，长21kb。用琼脂糖凝胶电泳观察其仍为21kb(图16-3-24，泳道1)。如果用限制酶BglⅡ酶切小染色体，产生的两个片段13.4和3.8kb加起来不到21kb(图16-3-24，泳道2)。用其他限制酶酶切DNA，所得片段大小加起来仍旧不足21kb，而且每一种消化所产生的片段大小之和均不同。

如果未切割的小染色体在跑电泳之前先经过变性退火，那么21kb片段将被切割成正好是其一半的10.5kb。用双链片段代替(图16-3-24，泳道3)，相似地，如果BglⅡ切割过的小染色体经变性和退火，则13.4kb片段将被其一半大小的6.7kb双链片段代替(图16-3-24，泳道4)。

请解释为什么限制酶切割下的片段加起来不是21kb？为什么经变性退火后其电泳形式就发生改变？你认为核糖体小染色体的序列是什么样的？

入到体外转录和翻译体系中可以产生10残基肽(vir-1)和5残基肽(vir-2)。

AGATCGGATGCTCAACTATATGTGATTAACAGAGCATGCGGCATAAACT

质粒pHUBI DNA是双链环状，长5.7kb(5.7×10³个碱基对)。这个质粒带有某基因，它的蛋白质产物使宿主细菌对四环素具有抗性(Tet-r)。该DNA对下列每种限制酶具有一个识别位点：EcoRI、HpaI、BamHI、PstI、SalI、BglII。在BarnHI和SalI位点处克隆会破环四环素抗性；在其他酶的位点处克隆则保留四环素抗性。用各种限制酶以及酶混合物消化可得到如表16-2-11所列的DNA片段。试在pHUBIDNA图上标出所有这些酶的切点。将DNA图画成环形，在圆周上以5.7kb总长标出刻度。

表16-2-11
酶混合物	片段长度(kb)
EcoRI EcoRI，BamHI EcoRI，HpaI EcoRI，SalI EcoRI，BglII EcoRI，PstI PstI，BglII BglII，HpaI	5.7 0.4，5.3 0.5，5.2 0.7，5.0 1.1，4.6 2.4，3.3 1.3，4.4 0.6，5.1

制区的位置，同时决定复制是沿起点的单向还是双向进行。为此目的，先分离出复制中的分子，用限制酶在一个位点切割病毒基因组使其成为一个线性分子，然后用电镜来观察所得到的分子。图Q2.7是所观察到的一些分子。(注意：电镜下不可能区分DNA分子的两端。)根据这一结果，如何判断：

图Q2.7 从一个起点开始的双向复制

(1)复制起点是单个还是多个？

(2)复制是单向还是双向？

个限制性片段。为确定精确位置，你将mRNA与纯化了的限制性片段退火，环境中具有DNA与RNA稳定杂交的双链，DNA两条链不能重新退火。电镜下检查退火的双链，结构如图8-3-28所示。在RNA/DNA杂合双链的末端为什么会有单链尾巴？

有一个30个碱基对的双链DNA片段，且含lac操纵基因顺序，把它插入到质粒中去。把该质粒引入到基因型为i⁺z⁺y⁺的大肠杆菌菌株。一旦构建成功，在每个细胞中就有30个拷贝的质粒。

关于滤膜结合法以下说法正确的是

A．硝酸纤维素法不能结合蛋白质，但可以结合双链DNA

B．硝酸纤维素法不能结合双链DNA，但可以结合单链DNA

C．硝酸纤维素法可以结合游离DNA片段

D．与蛋白质结合的DNA的片段可以结合在硝酸纤维素膜上

E．可以将双链DNA与单链DNA分离开来

大肠杆菌的dnaB基因编码一个在复制叉上可将DNA解折叠的解旋酶(DnaB)。已利用如图Q2.5所示的人工底物对它的特性进行了研究。实验方法是在多种条件下培养底物，然后把样品进行琼脂糖凝胶电泳。如果短单链DNA与长的DNA已退火结合在一起，那么泳动速率就会快些，但如果它已解折叠且已变性，则泳动速率就会慢些。把短链进行放射性标记就可选择性地跟踪它的迁移，然后用放射自显影检查它的位置。图Q2.6所示为几个实验的结果，底物1没有尾巴的杂交体，不被DnaB解折叠(图Q2.6，第1泳道、第2泳道)；但是有尾的底物和DnaB、ATP在37℃下温育同样能释放出大量解折叠的小片段(第6泳道、第10泳道)。对于底物3，只有3'部分片段是解折叠的(第10泳道)，所有的解折叠产物都绝对依赖于ATP的水解。加DNA单链结合蛋白(SSB)可在一定程度上加强这种解折叠(比较一下第5泳道、第9泳道与第10泳道)。有趣的是，SSB必须在DnaB加后3min加入，否则会抑制解折叠。

图Q2.5用来检测DnaB的底物

图Q2.6几个检测DnaB解折叠实验的结果，只有单链片段被放射性标记，它们各自的位置已在图中标明