碱性磷酸酶可在载体和待克隆的片段上形成同聚物尾，以便于进行克隆。（)

DNA克隆载体上的多克隆位点是为了同时连接多个外源DNA片段。( )

人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后，连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于多克隆位点的SalⅠ和NotⅠ之间，二者距离20 bp。 (1)从文库中分离出某克隆(克隆1)，分别用NotⅠ(N)、SalⅠ(S)或SalⅠ十NotⅠ(S十N)酶切后，电泳分离并用EB染色。DNA转移到膜上后，用载体上的DNA作为探针进行杂交，结果如下图所示：

假设同源序列50 bp以下则无杂交信号。在此基因组DNA上标上所有的SalⅠ和NotⅠ位点，标明酶切位点间距离。 (2)从同样的文库中分离到带有重叠片段的克隆(克隆2)，用同样的酶切、电泳、转膜后，以克隆1的DNA为探针(包括基因组DNA和载体DNA)进行southern杂交，结果如下图所示：

画出克隆2的图，标明所有SalⅠ和NotⅠ位点及位点间距离。 (3)所有的人类基因组DNA都用SalⅠ酶切，并用来自于克隆1或克隆2的DNA为探针作Southern杂交，结果如下图所示：

其中6个SalⅠ切点的位置可以用以上的结果来确定。请画出这一区域的SalⅠ位点图。

A.原核表达体系一般不适宜表达真核生物的蛋白质

B.涉及基因转录、翻译及转录后，翻译后的加工过程

C.所需载体为表达型载体

D.可在原核或真核表达体系中进行

E.克隆基因的表达过程在原核表达体系和真核表达体系是相同的

A.单酶切产物

B.双酶切产物

C.同裂酶产物

D.PCR产物

E.酶切后形成的平末端产物

A.用限制酶消化DNA。

B.把DNA连接入一个载体。

C.在胶上分离DNA片段

D.把DNA片段转移到硝酸纤维素膜上。

E.膜与标记的探针杂交。

质粒pHUBI DNA是双链环状，长5.7kb(5.7×10³个碱基对)。这个质粒带有某基因，它的蛋白质产物使宿主细菌对四环素具有抗性(Tet-r)。该DNA对下列每种限制酶具有一个识别位点：EcoRI、HpaI、BamHI、PstI、SalI、BglII。在BarnHI和SalI位点处克隆会破环四环素抗性；在其他酶的位点处克隆则保留四环素抗性。用各种限制酶以及酶混合物消化可得到如表16-2-11所列的DNA片段。试在pHUBIDNA图上标出所有这些酶的切点。将DNA图画成环形，在圆周上以5.7kb总长标出刻度。

表16-2-11
酶混合物	片段长度(kb)
EcoRI EcoRI，BamHI EcoRI，HpaI EcoRI，SalI EcoRI，BglII EcoRI，PstI PstI，BglII BglII，HpaI	5.7 0.4，5.3 0.5，5.2 0.7，5.0 1.1，4.6 2.4，3.3 1.3，4.4 0.6，5.1

能的直接检测。免疫染色表明，这种蛋白质定位于细胞核内，如同推测的一样，是一种转录因子。如果能够测出它所结合的DNA序列，就可以从现有的序列资料中查找已知基因启动子的天然位点，从而能够找到它所调节的基因。

有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA，思路是(图Q25.8)：①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体，在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)]；②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中，转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合；③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸；④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。

图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸，N代表任何一种核苷酸；EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路，用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验，这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链，经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后，用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA，将片段克隆到质粒中，并测定了10个独立的克隆(表Q25.1)，问：

表Q25.1 10个克隆的序列

注：画线的序列是PCR引物部位，两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始，所有序列中结合位点的方向都是相同的。