限制酶的识别和切割位点通常是4～8个bp长度且具有回文序列的DNA片段。（)

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识别顺序相同但切割位点不同者称（)酶，识别顺序与切割方式均相同者称（)酶，来源与识别顺序均不同，但切割后形成的限制性片段有相同的粘性末端，称（)酶。

II型限制酶识别位点一般长度为（)个核苷酸对。

A.T—DNA上有多个惟一的限制酶切割位点

B.具有可在细菌和转化植株中都可用的选择标记

C.具大肠杆菌复制起始点

D.具真核生物复制起始点

A.由两个仅识别半甲基化位点的亚基组成，甲基化位点相对于限制性位点的位置决定DNA是被甲基化还是被限制。

B.具甲基化与限制活性，依赖于亚基识别位点。MS促进甲基化，R促进限制性。

C.由加强识别和甲基化或限制性的两个亚基组成，接近识别位点。

D.主要功能是错配修复，因为DNA结合是根据构象扭转而不是序列错误的识别。

E.是一种光依赖酶，对于嘧啶二聚体的光复活很重要。因为它能切除相邻嘧啶碱基交联的共价键。

A.必须分离纯化出个体染色体。

B.DNA必须仅从单倍体细胞(基因组)分离，这可避免由于二倍体细胞中同源染色体的存在而引起的模糊信息。

C.必须进行单个染色体分析，这样的分析仅在细胞分裂后期才有可能进行。

D.必须发现一些在染色体上仅有一个切割位点的限制酶。

E.必须先分离核DNA和细胞器DNA，然后用它们来分析个体的图谱。

质粒pHUBI DNA是双链环状，长5.7kb(5.7×10³个碱基对)。这个质粒带有某基因，它的蛋白质产物使宿主细菌对四环素具有抗性(Tet-r)。该DNA对下列每种限制酶具有一个识别位点：EcoRI、HpaI、BamHI、PstI、SalI、BglII。在BarnHI和SalI位点处克隆会破环四环素抗性；在其他酶的位点处克隆则保留四环素抗性。用各种限制酶以及酶混合物消化可得到如表16-2-11所列的DNA片段。试在pHUBIDNA图上标出所有这些酶的切点。将DNA图画成环形，在圆周上以5.7kb总长标出刻度。

表16-2-11
酶混合物	片段长度(kb)
EcoRI EcoRI，BamHI EcoRI，HpaI EcoRI，SalI EcoRI，BglII EcoRI，PstI PstI，BglII BglII，HpaI	5.7 0.4，5.3 0.5，5.2 0.7，5.0 1.1，4.6 2.4，3.3 1.3，4.4 0.6，5.1

A.1/44

B.1/66

C.1/64

D.1/46

E.1/106

下列限制酶哪个或哪些可以准确切割下一段cDNA？这段cDNA可以编码多肽KIGPACF(N代表任一种核苷酸)。

限制酶 识别序列

AluI AGCT

Sau96I GGNCC

HindⅢ AAGCTT

酶切图谱(图Q25.10)。发现样品2有点突变，使得B^*、C^*切割位点丢失。请设计一种实验方案，利用图中所示的DNA区段作为探针，进行指纹和RELP分析。

图Q25.10 10kb片段二种酶切图谱

人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后，连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于多克隆位点的SalⅠ和NotⅠ之间，二者距离20 bp。 (1)从文库中分离出某克隆(克隆1)，分别用NotⅠ(N)、SalⅠ(S)或SalⅠ十NotⅠ(S十N)酶切后，电泳分离并用EB染色。DNA转移到膜上后，用载体上的DNA作为探针进行杂交，结果如下图所示：

假设同源序列50 bp以下则无杂交信号。在此基因组DNA上标上所有的SalⅠ和NotⅠ位点，标明酶切位点间距离。 (2)从同样的文库中分离到带有重叠片段的克隆(克隆2)，用同样的酶切、电泳、转膜后，以克隆1的DNA为探针(包括基因组DNA和载体DNA)进行southern杂交，结果如下图所示：

画出克隆2的图，标明所有SalⅠ和NotⅠ位点及位点间距离。 (3)所有的人类基因组DNA都用SalⅠ酶切，并用来自于克隆1或克隆2的DNA为探针作Southern杂交，结果如下图所示：

其中6个SalⅠ切点的位置可以用以上的结果来确定。请画出这一区域的SalⅠ位点图。