将质粒DNA与果蝇DNA的BglI酶解液一起退火，然后去转化大肠杆菌。

用EcoRI酶解具有单个EcoRI位点的Tet-r质粒。将样品退火，用DNA连接酶处理，然后进行CaCl₂转化实验。挑选Tet-r菌落。从这些菌落中分离出质粒DNA，进行凝胶电泳，结果发现有两类菌落：一类菌落在原来质粒的预期位置处出现一条带；另一类菌落则得到一条移动慢得多的带。这条移动慢的带可能是何物？(用BglI酶处理Kan-rAmp-r质粒会破坏amp基因)

段插入质粒pBR322，转化到A基因缺失的大肠杆菌突变体中，并找一种需要A基因活性的选择标记。对基因B的实验是，用反转录酶合成袋鼠肝细胞mRNA，已知肝细胞含有可合成大量酶B的DNA拷贝。然后将这些DNA拷贝插入pBR322，转化到不能合成有功能B酶的大肠杆菌突变体中，将B活性作为选择标记。

与信号转导有关。如何证实你的推测？

纤维素膜上。DNA片段A到G被用作探针，与膜进行杂交，结果如图所示：

指出参与转录的DNA片段以及该片段参与哪个mRNA的转录。内含子、外显子的分布与酶切片段之间有什么联系？

质粒pHUBI DNA是双链环状，长5.7kb(5.7×10³个碱基对)。这个质粒带有某基因，它的蛋白质产物使宿主细菌对四环素具有抗性(Tet-r)。该DNA对下列每种限制酶具有一个识别位点：EcoRI、HpaI、BamHI、PstI、SalI、BglII。在BarnHI和SalI位点处克隆会破环四环素抗性；在其他酶的位点处克隆则保留四环素抗性。用各种限制酶以及酶混合物消化可得到如表16-2-11所列的DNA片段。试在pHUBIDNA图上标出所有这些酶的切点。将DNA图画成环形，在圆周上以5.7kb总长标出刻度。

表16-2-11
酶混合物	片段长度(kb)
EcoRI EcoRI，BamHI EcoRI，HpaI EcoRI，SalI EcoRI，BglII EcoRI，PstI PstI，BglII BglII，HpaI	5.7 0.4，5.3 0.5，5.2 0.7，5.0 1.1，4.6 2.4，3.3 1.3，4.4 0.6，5.1

A.一般情况下，用同一种限制酶切割质粒和含有目的基因的片段，但有时可用两种限制酶分别切割质粒和目的基因，这样可避免质粒和质粒之间、目的基因和目的基因之间的连接

B.标记基因的作用：筛选、检测目的基因是否导入受体细胞，常见的标记基因有抗生素抗性基因、发光基因（表达产物为带颜色的物质）等

C.在基因表达载体中，启动子（DNA片段）转录出起始密码子（RNA）；终止子（DNA片段）转录出终止密码子（RNA）

D.用CaCl2处理大肠杆菌使之转变为感受态，细胞透性加大有利于DNA透过大肠杆菌

mRNA往往是用各种杂交技术检测的，也就是通过mRNA与单链DNA一起保温，形成DNA-RNA杂交物。有一种技术，把单链DNA吸附在硝酸纤维素滤膜上，加上放射性标记的RNA，然后在导致杂交作用的条件下将混合物保温。游离RNA并不结合到滤膜上，所以滤膜洗涤后所结合的放射性量就是被杂交的RNA量。在某实验中，从感染噬菌体1分钟的细胞中分离出放射性mRNA，然后与分别吸咐在滤膜上的三种不同的DNA分子杂交。DNA分子如图9-3-10所示，其中的数字表示离DNA左侧的距离，相对距离范围为0～100。用野生型噬菌体(Ⅰ)感染细菌。在噬菌体DNA分子Ⅱ和Ⅲ中的阴影区代表噬菌体携带的细菌DNA。接着在两张滤膜上对各类DNA进行杂交试验，吸附有每一类DNA的一张滤膜与核酸酶一起保温(RNase，该酶酶解单链RNA但不酶解杂交的RNA)；另一张滤膜不用酶处理(-RNase)。得到的数据如表9-3-10所示。试问mRNA从野生型DNA中的哪个区域转录？

表9-3-10
滤膜上的DNA	滤膜上的cpm
-RNase	+RNase
Ⅰ Ⅱ Ⅲ	1250 1260 1240	1245 418 820

一般经体外酶切连接操作后的载体DNA或重组DNA其转化率低于具有超螺旋结构的质粒是由于其（)发生改变。

关于重组DNA技术的叙述，错误的是()。

A．质粒、噬菌体可作为载体

B．限制性内切酶是主要工具酶之一

C．重组DNA由载体DNA和目标DNA组成

D．重组DNA分子经转化或转染可进入宿主细胞

E．进入细胞内的重组DNA均可表达目标蛋白